फ्लोरोसेन्स फिल्टर फ्लोरोसेन्स माइक्रोस्कोपमा एक आवश्यक घटक हो।एक सामान्य प्रणालीमा तीनवटा आधारभूत फिल्टरहरू हुन्छन्: एक उत्तेजना फिल्टर, एक उत्सर्जन फिल्टर र एक डाइक्रोइक मिरर।तिनीहरू सामान्यतया क्यूबमा प्याकेज हुन्छन् ताकि समूहलाई माइक्रोस्कोपमा सँगै सम्मिलित गरिन्छ।
![结构](http://www.bestscopeus.com/uploads/结构1.jpg)
फ्लोरोसेन्स फिल्टरले कसरी काम गर्छ?
उत्तेजना फिल्टर
उत्तेजना फिल्टरहरूले एक विशिष्ट तरंगदैर्ध्यको प्रकाश प्रसारण गर्दछ र अन्य तरंगदैर्ध्यहरूलाई रोक्छ।तिनीहरू फिल्टर ट्युन गरेर केवल एक रङ मार्फत अनुमति दिन विभिन्न रङहरू उत्पादन गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ।उत्तेजना फिल्टरहरू दुई मुख्य प्रकारहरूमा आउँछन् - लामो पास फिल्टरहरू र ब्यान्ड पास फिल्टरहरू।एक्साइटर सामान्यतया ब्यान्डपास फिल्टर हो जसले फ्लोरोफोर द्वारा अवशोषित तरंगदैर्ध्यहरू मात्र पार गर्दछ, यसरी फ्लोरोसेन्सका अन्य स्रोतहरूको उत्तेजनालाई कम गर्दछ र फ्लोरोसेन्स उत्सर्जन ब्यान्डमा उत्तेजना प्रकाश अवरुद्ध गर्दछ।चित्रमा नीलो रेखाले देखाएको रूपमा, BP 460-495 हो, जसको मतलब यो 460-495nm को फ्लोरोसेन्सबाट मात्र पार गर्न सक्छ।
यो फ्लोरोसेन्स माइक्रोस्कोपको रोशनी मार्ग भित्र राखिएको छ र फ्लोरोफोर उत्तेजना दायरा बाहेक प्रकाश स्रोतको सबै तरंगदैर्ध्यहरू फिल्टर गर्दछ।फिल्टर न्यूनतम प्रसारणले छविहरूको चमक र चमक निर्धारण गर्दछ।कुनै पनि उत्तेजना फिल्टरको लागि न्यूनतम 40% प्रसारण सिफारिस गरिएको छ कि प्रसारण आदर्श रूपमा> 85% हो।उत्तेजना फिल्टरको ब्यान्डविथ पूर्णतया फ्लोरोफोर उत्तेजना दायरा भित्र हुनुपर्छ जस्तै फिल्टरको केन्द्र तरंगदैर्ध्य (CWL) फ्लोरोफोरको शिखर उत्तेजना तरंगदैर्ध्यको सकेसम्म नजिक छ।उत्तेजना फिल्टर अप्टिकल घनत्व (OD) ले पृष्ठभूमि छवि अन्धकारलाई निर्देशित गर्दछ;ओडी भनेको प्रसारण दायरा वा ब्यान्डविथ बाहिरको तरंग लम्बाइलाई फिल्टरले कति राम्रोसँग रोक्छ भन्ने मापन हो।3.0 को न्यूनतम OD सिफारिस गरिएको छ तर 6.0 वा माथिको OD आदर्श हो।
![वर्णक्रम रेखाचित्र](http://www.bestscopeus.com/uploads/Spectral-diagram.png)
उत्सर्जन फिल्टर
उत्सर्जन फिल्टरहरूले नमूनाबाट वांछनीय फ्लोरोसेन्सलाई डिटेक्टरमा पुग्न अनुमति दिने उद्देश्यलाई सेवा गर्दछ।तिनीहरू छोटो तरंगदैर्ध्यलाई रोक्छन् र लामो तरंगदैर्ध्यको लागि उच्च प्रसारण हुन्छ।फिल्टर प्रकार पनि संख्यासँग सम्बन्धित छ, जस्तै BA510IF चित्रमा (हस्तक्षेप अवरोध फिल्टर), त्यो पदनामले यसको अधिकतम प्रसारणको 50% मा तरंग लम्बाइलाई जनाउँछ।
उत्सर्जन फिल्टरहरूको लागि उही सिफारिसहरू उत्सर्जन फिल्टरहरूको लागि सही हो: न्यूनतम प्रसारण, ब्यान्डविथ, OD, र CWL।आदर्श CWL, न्यूनतम प्रसारण, र OD संयोजनको साथ एक उत्सर्जन फिल्टरले सबैभन्दा गहिरो सम्भावित ब्लकिङको साथ, उज्यालो सम्भावित छविहरू प्रदान गर्दछ, र सबैभन्दा कम उत्सर्जन संकेतहरूको पहिचान सुनिश्चित गर्दछ।
Dichroic मिरर
डाइक्रोइक मिरर एक्साइटेशन फिल्टर र उत्सर्जन फिल्टरको बिचमा ४५° कोणमा राखिएको छ र डिटेक्टरतर्फ उत्सर्जन संकेत प्रसारण गर्दा फ्लोरोफोरतर्फ उत्तेजना संकेत प्रतिबिम्बित गर्दछ।आदर्श डाइक्रोइक फिल्टरहरू र बीम स्प्लिटरहरूमा एक्साइटेशन फिल्टरको ब्यान्डविथको लागि > 95% प्रतिबिम्ब र उत्सर्जन फिल्टरको ब्यान्डविथको लागि 90% प्रसारणको साथ अधिकतम प्रतिबिम्ब र अधिकतम प्रसारणको बीचमा तीव्र संक्रमण हुन्छ।स्ट्रे-लाइटलाई न्यूनीकरण गर्न र फ्लोरोसेन्ट छवि संकेत-देखि-शोर अनुपातलाई अधिकतम बनाउन फ्लोरोफोरको प्रतिच्छेदन तरंग लम्बाइ (λ) सँग फिल्टर चयन गर्नुहोस्।
यस चित्रमा रहेको डाइक्रोइक मिरर DM505 हो, त्यसैले यो नाम दिइएको हो किनभने 505 न्यानोमिटर यो ऐनाको लागि अधिकतम प्रसारणको 50% मा तरंग लम्बाइ हो।यस मिररको प्रसारण कर्भले ५०५ एनएमभन्दा माथि उच्च प्रसारण देखाउँछ, ५०५ न्यानोमिटरको बायाँतिर ट्रान्समिशनमा ठूलो गिरावट, र ५०५ न्यानोमिटरको बायाँतिर अधिकतम परावर्तितता देखाउँछ तर अझै पनि ५०५ एनएमभन्दा कम प्रसारण हुन सक्छ।
लामो पास र ब्यान्ड पास फिल्टरहरू बीच के भिन्नता छ?
फ्लोरोसेन्स फिल्टरहरूलाई दुई प्रकारमा विभाजन गर्न सकिन्छ: लामो पास (LP) र ब्यान्ड पास (BP)।
लामो पास फिल्टरहरूले लामो तरंगदैर्ध्यहरू प्रसारण गर्छन् र छोटोहरूलाई रोक्छन्।कट-अन तरंगदैर्ध्य शिखर प्रसारणको 50% मा मानिन्छ, र कट-अन माथिका सबै तरंग दैर्ध्यहरू लामो पास फिल्टरहरूद्वारा प्रसारित हुन्छन्।तिनीहरू प्रायः डाइक्रोइक मिरर र उत्सर्जन फिल्टरहरूमा प्रयोग गरिन्छ।अनुप्रयोगलाई अधिकतम उत्सर्जन सङ्कलन आवश्यक हुँदा र स्पेक्ट्रल भेदभाव वांछनीय वा आवश्यक नभएको बेलामा Longpass फिल्टरहरू प्रयोग गरिनुपर्छ, जुन सामान्यतया पृष्ठभूमि अटोफ्लोरेसेन्सको अपेक्षाकृत कम स्तर भएका नमूनाहरूमा एकल उत्सर्जन गर्ने प्रजातिहरू उत्पन्न गर्ने प्रोबहरूको मामला हो।
ब्यान्ड पास फिल्टरहरूले एक निश्चित तरंगदैर्ध्य ब्यान्ड मात्र प्रसारण गर्दछ, र अरूलाई रोक्छ।तिनीहरूले फ्लोरोफोर उत्सर्जन स्पेक्ट्रमको सबैभन्दा बलियो भागलाई मात्र प्रसारण गर्न अनुमति दिएर क्रसस्टक कम गर्दछ, अटोफ्लोरेसेन्स आवाज कम गर्दछ र यसरी उच्च पृष्ठभूमि अटोफ्लोरेसेन्स नमूनाहरूमा सिग्नल-टू-शोर अनुपात सुधार गर्दछ, जुन लामो पास फिल्टरहरूले प्रस्ताव गर्न सक्दैन।
कति प्रकारका फ्लोरोसेन्स फिल्टर सेटहरू BestScope ले आपूर्ति गर्न सक्छ?
केही सामान्य प्रकारका फिल्टरहरूमा नीलो, हरियो र पराबैंगनी फिल्टरहरू समावेश छन्।तालिकामा देखाइएको अनुसार।
फिल्टर सेट | उत्तेजना फिल्टर | Dichroic मिरर | ब्यारियर फिल्टर | एलईडी बत्ती तरंग लम्बाइ | आवेदन |
B | BP460-495 | DM505 | BA510 | ४८५ एनएम | · FITC: फ्लोरोसेन्ट एन्टिबडी विधि एसिडिन सुन्तला: डीएनए, आरएनए Auramine: Tubercle bacillus ·EGFP, S657, RSGFP |
G | BP510-550 | DM570 | BA575 | ५३५ एनएम | रोडामाइन, TRITC: फ्लोरोसेन्ट एन्टिबडी विधि प्रोपिडियम आयोडाइड: डीएनए · आरएफपी |
U | BP330-385 | DM410 | BA420 | ३६५ एनएम | · स्वत: प्रतिदीप्ति अवलोकन · DAPI: DNA दाग · Hoechest 332528, 33342: क्रोमोजोम दागको लागि प्रयोग गरिन्छ |
V | BP400-410 | DM455 | BA460 | ४०५ एनएम | · Catecholamines ५-हाइड्रोक्सी ट्रिप्टामाइन टेट्रासाइक्लिन: कंकाल, दाँत |
R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · Cy5 एलेक्सा फ्लोर ६३३, एलेक्सा फ्लोर ६४७ |
फ्लोरोसेन्स अधिग्रहणहरूमा प्रयोग हुने फिल्टर सेटहरू फ्लोरोसेन्स अनुप्रयोगहरूमा प्रयोग हुने प्रमुख तरंग लम्बाइको वरिपरि डिजाइन गरिएका छन्, जुन सबैभन्दा बढी प्रयोग हुने फ्लोरोफोरहरूमा आधारित छ।यस कारणका लागि, तिनीहरू फ्लोरोफोरको नाममा पनि राखिएका छन् जुन तिनीहरू इमेजिङको लागि अभिप्रेरित छन्, जस्तै DAPI (नीलो), FITC (हरियो) वा TRITC (रातो) फिल्टर क्यूबहरू।
फिल्टर सेट | उत्तेजना फिल्टर | Dichroic मिरर | ब्यारियर फिल्टर | एलईडी बत्ती तरंग लम्बाइ |
FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | ४८५ एनएम |
DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | ३६५ एनएम |
TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | ५३५ एनएम |
FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | ४५० एनएम |
टेक्सास रातो | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
![छविहरू](http://www.bestscopeus.com/uploads/Images.png)
तपाईं प्रतिदीप्ति फिल्टर कसरी छनौट गर्नुहुन्छ?
1. प्रतिदीप्ति फिल्टर छनोट गर्ने सिद्धान्त भनेको फ्लोरोसेन्स/उत्सर्जन प्रकाशलाई सम्भव भएसम्म इमेजिङ अन्त्यबाट पास गर्न दिनु हो, र एकै समयमा उत्तेजना प्रकाशलाई पूर्ण रूपमा रोक्नुहोस्, ताकि उच्चतम सङ्केत-देखि-शोर अनुपात प्राप्त गर्नुहोस्।विशेष गरी मल्टिफोटोन उत्तेजना र कुल आन्तरिक प्रतिबिम्ब माइक्रोस्कोपको प्रयोगको लागि, कमजोर आवाजले इमेजिङ प्रभावमा ठूलो हस्तक्षेप पनि निम्त्याउँछ, त्यसैले आवाज अनुपातमा संकेतको आवश्यकता बढी हुन्छ।
2. फ्लोरोफोरको उत्तेजना र उत्सर्जन स्पेक्ट्रम जान्नुहोस्।फ्लोरोसेन्स फिल्टर सेट निर्माण गर्न जसले कालो पृष्ठभूमि, उत्तेजना र उत्सर्जन फिल्टरहरू फ्लोरोफोर उत्तेजना चुचुरा वा उत्सर्जनसँग मिल्दोजुल्दो क्षेत्रहरूमा न्यूनतम पासब्यान्ड लहरको साथ उच्च प्रसारण प्राप्त गर्नुपर्छ।
3. फ्लोरोसेन्स फिल्टरहरूको स्थायित्वलाई विचार गर्नुहोस्।यी फिल्टरहरू तीव्र प्रकाश स्रोतहरूको लागि अभेद्य हुनुपर्दछ जसले अल्ट्राभायोलेट (UV) प्रकाश उत्पन्न गर्दछ जसले "बर्नआउट" निम्त्याउन सक्छ, विशेष गरी एक्साइटर फिल्टरको कारण यो प्रकाश स्रोतको पूर्ण तीव्रताको अधीनमा छ।
विभिन्न फ्लोरोसेन्ट नमूना छविहरू
![BS-2083F+BUC5F-830CC को फ्लोरोसेन्स छविहरू](http://www.bestscopeus.com/uploads/Fluorescence-Images-of-BS-2083F+BUC5F-830CC.jpg)
![BS-2081F+BUC5IB-830C को फ्लोरोसेन्स छविहरू](http://www.bestscopeus.com/uploads/Fluorescence-Images-of-BS-2081F+BUC5IB-830C.jpg)
स्रोतहरू सङ्कलन र इन्टरनेटमा व्यवस्थित छन्, र केवल सिक्न र सञ्चारको लागि प्रयोग गरिन्छ।यदि त्यहाँ कुनै उल्लङ्घन छ भने, कृपया मेटाउन हामीलाई सम्पर्क गर्नुहोस्।
पोस्ट समय: डिसेम्बर-०९-२०२२